Встановлення радянської влади на Волині у вересні 1939 року призвело до докорінної зміни статусу замкового осередку, завершившись його офіційною націоналізацією у 1940 році. На базі давньосховища колишнього Братства та розрізнених повітових збірок було створено державну установу — Острозький історичний музей. Перехід у державну власність надав музею стабільне фінансування та штатних працівників, проте, водночас, підпорядкував його діяльність жорстким ідеологічним рамкам і радянським стандартам обліку. Попри політичні трансформації, перереєстрація дозволила зберегти основний масив пам’яток та інтегрувати острозьку колекцію в офіційну музейну мережу. Націоналізація 1940 року завершила міжвоєнний етап напів аматорського функціонування, заклавши організаційні передумови для подальшого формування сучасного державного історико-культурного заповідника.